Evaluation of antimicrobial, cytotoxic and chemopreventive activities of carvone and its derivatives

ABSTRACT Considering the reported activity of carvone in the literature, this study aimed to evaluate the antimicrobial, cytotoxic and chemopreventive activities of (+)- and (-)-carvone, (+)- and (-)- hydroxydihydrocarvone and α,ß-epoxycarvone. (+)-Hydroxydihydrocarvone (HC+), (-)-hydroxydihydrocarvone (HC-) and α,ß-epoxycarvone (EP) were obtained by synthesis using (+)-carvone (C+) or (-)-carvone (C-) as precursors. The antifungal activity (MIC and MFC) were evaluated against Candida parapsilosis, C. tropicalis, C. krusei and C. albicans and the antibacterial activity (MIC and MBC) against Escherichia coli and Staphylococcus aureus. The cytotoxicity assays were performed with human cancer cell lines HepG-2 and SiHa and the normal strain MRC-5 through sulphorrodamine B assay. Chemoprevention was evaluated through quinone reductase assay. Our results showed no cytotoxicity on tumor and normal cell lines and no induction of the quinone reductase enzyme. C- and HC- presented activity against E. coli. All compounds presented weak antifungal activity against C. tropicalis and C. parapsilosis. EP and C+ showed moderate activity against C. krusei. Results suggest the potential use of carvones and its derivatives as antifungal agents against Candida yeasts. The absence of cytotoxicity in cell lines indicates safety in the use of these compounds

Cytotoxicity and genotoxicity of calcium silicate-based cements on an osteoblast lineage

Abstract Several calcium silicate-based biomaterials have been developed in recent years, in addition to Mineral Trioxide Aggregate (MTA). The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity, genotoxicity and apoptosis/necrosis in human osteoblast cells (SAOS-2) of pure calcium silicate-based cements (CSC) and modified formulations: modified calcium silicate-based cements (CSCM) and three resin-based calcium silicate cements (CSCR1) (CSCR 2) (CSCR3). The following tests were performed after 24 hours of cement extract exposure: methyl-thiazolyl tetrazolium (MTT), apoptosis/necrosis assay and comet assay. The negative control (CT-) was performed with untreated cells, and the positive control (CT+) used hydrogen peroxide. The data for MTT and apoptosis were submitted to analysis of variance and Bonferroni's posttest (p < 0.05), and the data for the comet assay analysis, to the Kruskal-Wallis and Dunn tests (p < 0.05). The MTT test showed no significant difference among the materials in 2 mg/mL and 10 mg/mL concentrations. CSCR3 showed lower cell viability at 10 mg/mL. Only CSC showed lower cell viability at 50 mg/mL. CSCR1, CSCR2 and CSCR3 showed a higher percentage of initial apoptosis than the control in the apoptosis test, after 24 hours exposure. The same cements showed no genotoxicity in the concentration of 2 mg/mL, with the comet assay. CSC and CSCR2 were also not genotoxic at 10 mg/mL. All experimental materials showed viability with MTT. CSC and CSCR2 presented a better response to apoptosis and genotoxicity evaluation in the 10 mg/mL concentration, and demonstrated a considerable potential for use as reparative materials.

Greater expression of the human leukocyte antigen-G (HLA-G) and interleukin-17 (IL-17) in cervical intraepithelial neoplasia: analytical cross-sectional study / Aumento da expressão do antígeno leucocitário humano-G (HLA-G) e interleucina-17 (IL-17) em neoplasia intraepitelial cervical: estudo transversal analítico

CONTEXT AND OBJECTIVE:Impaired local cell immunity seems to contribute towards the pathogenesis and progression of cervical intraepithelial neoplasia (CIN), but the underlying molecular mechanisms promoting its progression remain unclear. Identification of new molecular markers for prognosis and diagnosis of early-stage CIN may aid in decreasing the numbers of CIN cases. Several novel immunoregulatory molecules have been discovered over the past few years, including the human leukocyte antigen G (HLA-G), which through interaction with its receptors exerts important tolerogenic functions. Several lines of evidence suggest that T-helper interleukin-17 (IL-17)-producing cells (Th17 cells) may play a role in antitumor immunity. However, recent reports have implicated Th17 cells and their cytokines in both pro and anti-tumorigenic processes. The aim of the study was to evaluate the roles of HLA-G and Th17 in the immunopathogenesis of CIN I.DESIGN AND SETTING:Analytical cross-sectional study with a control group using 58 cervical specimens from the files of a public university hospital providing tertiary-level care.METHODS:We examined HLA-G and IL-17 expression in the cervical microenvironment by means of immunohistochemistry, and correlated these findings with clinical and pathological features.RESULTS:There was a greater tendency towards HLA-G and IL-17 expression in specimens that showed CIN I, thus suggesting that these molecules have a contribution towards cervical progression.CONCLUSION:These findings suggest that HLA-G and IL-17 expression may be an early marker for assessing the progression of cervical lesions.

CONTEXTO E OBJETIVO:A deficiência na imunidade celular localizada parece contribuir para a patogênese e progressão das neoplasias intraepiteliais cervicais (NIC), no entanto, ainda não está totalmente esclarecido o mecanismo molecular fundamental nesse processo de progressão. A identificação de novos marcadores moleculares de prognóstico e diagnóstico das NIC em estágios precoces pode ajudar a diminuir a quantidade de casos de NIC. Várias novas moléculas com função imunorregulatória foram descobertas nos últimos anos, inclusive o antígeno leucocitário humano G (HLA-G), que, através de interação com os receptores, tem importantes funções tolerogênicas. Diversas linhas de evidência sugerem que as células T-ajudantes produtoras de interleucina-17 (IL-17, células Th17), podem desempenhar um papel na imunidade antitumoral. Porém, recentes relatos implicaram as células Th17 e suas citocinas tanto em processos pro- quanto anti-tumorigênicos. O objetivo do estudo foi avaliar o papel do HLA-G e Th17 na imunopatogênese das NIC I.TIPO DE ESTUDO E LOCAL:Estudo transversal analítico com grupo controle em 58 espécimes cervicais dos arquivos de um hospital universitário público com assistência prestada no nível terciário.MÉTODOS:Avaliamos a expressão de HLA-G e IL-17 por imunoistoquímica no microambiente cervical, associando esses achados com as características clínico-patológicas.RESULTADOS:Houve tendência aumentada da expressão de HLA-G e IL-17 em espécimes que apresentaram NIC I, sugerindo que essas moléculas têm contribuição na progressão cervical.CONCLUSÃO:Estes resultados sugerem que a expressão do HLA-G e da IL-17 pode ser um marcador precoce para avaliar a progressão das lesões cervicais.

Influence of the Paracoccidioides brasiliensis 14-3-3 and gp43 proteins on the induction of apoptosis in A549 epithelial cells

The fungal strain Paracoccidioides brasiliensis remains viable inside of epithelial cells and can induce apoptosis in this population. However, until now, the molecules that participate in this process remained unknown. Thus, this study evaluated the contribution of two P. brasiliensis molecules, the 14-3-3 and glycoprotein of 43 kDa proteins, which had been previously described as extracellular matrix adhesins and apoptosis inductors in human pneumocytes. Accordingly, epithelial cells were treated with these molecules for different periods of time and the expression of the apoptosis regulating-proteins Bak, Bax, Bcl-2, p53 and caspases were evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labelling, flow cytometry and real-time polymerase chain reaction analysis. Our results demonstrated that treatment with these molecules induces apoptosis signalling in pulmonary epithelial cells, showing the same pattern of programmed cell-death as that observed during infection with P. brasiliensis. Thus, we could conclude that P. brasiliensis uses these molecules as virulence factors that participate not only in the fungal adhesion process to host cells, but also in other important cellular mechanisms such as apoptosis.

Induction of apoptosis in A549 pulmonary cells by two Paracoccidioides brasiliensis samples

Paracoccidioidomycosis presents a variety of clinical manifestations and Paracoccidioides brasiliensis can reach many tissues, most importantly the lungs. The ability of the pathogen to interact with host surface structures is essential to its virulence. The interaction between P. brasiliensis and epithelial cells has been studied, with particular emphasis on the induction of apoptosis. To investigate the expression of different apoptosis-inducing pathways in human A549 cells, we infected these cells with P. brasiliensis Pb18SP (subcultured) and 18R (recently isolated from cell culture and showing a high adhesion pattern) samples in vitro. The expressions of Bcl-2, Bak and caspase 3 were analysed by flow cytometry and DNA fragmentation using the TUNEL technique. Apoptosis of human A549 cells was induced by P. brasiliensis in a sample and time-dependent manner. Using an in vitro model, our data demonstrates that caspase 3, Bak, Bcl-2 and DNA fragmentation mediate P. brasiliensis-induced apoptosis in A549 cells. The overall mechanism is a complex process, which may involve several signal transduction pathways. These findings could partially explain the efficient behaviour of this fungus in promoting tissue infection and/or blood dissemination.

Evaluation of micronuclei frequency in Tradescantia pallida pollen mother cells treated with ethanolic extracts isolated from Cryptocarya mandioccana, Cryptocarya moschata and Pterogyne nitens

Apesar de extratos vegetais possuírem uma série de compostos com atividade farmacológica, eles podem também apresentar substâncias com potencial mutagênico. O objetivo do atual estudo é avaliar a mutagenicidade do extrato etanólico das plantas: Cryptocarya mandioccana, Cryptocarya moschta e Pterogyne nitens utilizando o ensaio do micronúcleo em células mãe de grão de pólen (tétrades) de Tradescantia pallida (Trad-MCN). Inflorescências de T. pallida foram tratadas com diferentes concentrações do extrato etanólico das plantas selecionadas. Para C. mandioccana, C. moschata e P. nitens o ensaio Trad-MCN foi executado os tratamentos, controle positivo (formaldeido 10000 ppm), controle negativo (solução de Hoagland), e controle de veículo (Tween 20 por cento ou DMSO 3 por cento). Os micronúcleos foram quantificados em 300 tétrades/inflorescência, a média e o erro padrão foram estabelecidos no mínimo para 10 inflorescências/tratamento. Os extratos avaliados demonstraram efeito clastogênico dose resposta, respectivamente: C. mandioccana (0.5, 1.0 e 2.0 mg/mL) e P. nitens (1.0 and 2.0 mg/mL). Entretanto, C. moschata não demonstrou atividade clastogênica/aneugênica nas concentrações avaliadas no presente estudo. A partir desses resultados foi possível concluir que os extratos de C. mandioccana and P. nitens apresentaram atividade clastogênica/aneugênica nas maiores concentrações enquanto o extrato C. moschata não apresentou o mesmo efeito.

Although herbal extracts contain several classes of compounds with pharmacological activity, they also present toxic substances with mutagenic effects. The aim of the present study was to verify the mutagenicity of Cryptocarya moschata, Cryptocarya mandioccana and Pterogyne nitens using micronucleus assay in pollen mother cells (tetrads) in Tradescantia pallida (Trad-MCN). T. pallida inflorescences were treated with different concentrations of ethanolic extracts from the selected plant species. For C. mandioccana C. moschata and P. nitens, Trad-MCN assays were carried out simultaneoulsly, followed by positive control (formaldehyde 10000 ppm), negative control (Hoagland's solution), and vehicle control (Tween 20 20 percent or DMSO 3 percent). MCN present in tetrads were quantified in 300 tetrads/inflorescence and the mean(percent) and standard error (SE) were established for at least 10 inflorescences per treatment. The extracts demonstrated dose response mutagenicity (clastogenic/aneugenic effects), respectively, C. mandioccana (0.5, 1.0 and 2.0 mg/mL) and P. nitens (1.0 and 2.0 mg/mL) However, no mutagenic effect was observed to C. moschata at the concentrations evaluated in the present study. We can conclude that the C. mandioccana and P. nitens extracts demonstrated clastogenic/aneugenic effects in highest concentrations whereas C. moschata extract did not demonstrate the same effect.

Presença do papilomavirus humano em lesöes malignas de mucosa oral / Presence of human papillomavirus in malignant oral lesions

O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência do papilomavírus humano 6/11 e 16/18 em pacientes, com lesöes orais clínicamente diagnosticadas como leucoplasias, atendidas na Faculdade de Odontologia de Araraquara, UNESP, Brasil. Após a inclusäo em parafina, os cortes corados com H&E, foram selecionadas 30 biópsias e separadas em 3 grupos: lesöes sem displasia (n=10), lesöes com diferentes graus de displasia (n=10) e carcinoma espinocelular invasivo(n=10). As lesöes que apresentaram displasia epitelial foram classificadas de acordo com os critérios histopatológicos propostos por Van Der Waal. As lesöes foram investigadas para a presença de HPV por hibridizaçäo in situ com sondas biotiniladas de amplo espectro, 6/11 e 16/18. HPV 16/18 foi detectado em 20 por cento (n=2) das biópsias com displasia severa. A presença de HPV 16/18 em lesöes malignas sugere sua importância como fator de risco na carcinogênese oral

Papilomavírus humano (HPV) em lesões benignas e malignas de mucosa oral pelos métodos de imuno-histoquímica e hibridização in situ / Human papillomavirus (HPV)in benign and malignant oral lesions by immunohistochemistry and in situ hybridization methods

Quinze biópsias orais com diagnóstico histopatológico de papiloma (n=7), e carcinoma espinocelular invasivo (n=8) foram investigadas para a presença do papilomavírus humano (HPV) por imuno-histoquímica (IHQ) e hibridização in situ (HIS). As proteínas do capsídeo viral foram avaliadas por imuno-histoquímica com anticorpo policlonal e o DNA do vírus analisado por hibridização in situ com sondas biotiniladas de amplo espectro, 6/11 e 16/18. O HPV foi detectado por IHQ em 13 por cento (n=2) e, por HIS, em 60 por cento (n=9) das lesões orais. As duas biópsias positivas na IHQ também foram positivas para a presença do DNA de HPV 6/11. Além disso, o HPV 16/18 foi encontrado em 20 por cento dos carcinomas orais e em 7 por cento dos papilomas, enquanto o HPV 6/11 foi detectado em 7 por cento dos carcinomas e 26 por cento dos papilomas. Pode-se concluir deste estudo que a reação imuno-histoquímica é pouco sensível para o diagnóstico de HPV e que a presença do HPV 16/18 em lesões benignas e malignas sugere a participação deste vírus na carcinogênese oral.

Estudo comparativo de métodos utilizados para obtençäo de diferentes células em lavado nasal de voluntários residentes na cidade de Araraquara - SP / A comparative sudy of the methods used for the recovery of different cells in the nasal lavage among volunteer personal in the city of Araraquara, SP

Dentre os efeitos que a poluiçäo causa à saúde humana, a irritaçäo da mucosa exposta é o evento mais recente e também o mais óbvio. A mucosa, sob contínua agressäo de poluentes dispersos em aerossóis, apresenta processo inflamatório. Os habitantes de Araraquara, SP, estäo expostos à queima de cana-de-açúcar em quase todos os meses do ano. Este poluente é também responsável por danos à mucosa nasal. A maior dificuldade para o estudo de células em lavado nasal é a recuperaçäo celular, pois o muco as mantém firmemente aderidas, impedindo sua quantificaçäo adequada. Este estudo propöe a avaliaçäo de dois métodos para a recuperaçäo de células no lavado nasal de 26 voluntários, o método clássico modificado utilizando os mucolíticos N-acetilcisteína e ditiotreitol. O melhor método de recuperaçäo de leucócitos(P=0,038; p<0,05) e hemácias (P=0,0435, p<0,05) foi o da agitaçäo. Para células epiteliais, os dois métodos mostraram-se semelhantes em eficiência (P=0,865, p>0,005). Entretanto os mucolíticos N-acetilcisteína e ditiotreitol comprometem a arquitetura celular, dificultando sua análise morfotintorial. Em conclusäo, o método da agitaçäo mostrou-se mais eficiente para a recuperaçäo de leucócitos e hemácias em lavado nasal, enquanto para células epiteliais ambos os métodos mostraram-se eficientes.

Papilomavírus humano (HPV) - um estudo de revisäo / Human papillomavirus (HPV) - a review

O papilomavírus humano (HPV) é um vírus epiteliotrófico que induz a formaçäo de lesöes benignas e malignas nos diversos sítios corporais. É um vírus DNA, dupla fita, pequeno, circular e näo envelopado, com 75 tipos identificados. Frequentemente, os HPVs 6, 11 (lesöes benignas) e 16, 18 (lesöes malignas) säo encontrados na mucosa. A infecçäo viral ocorre nas células da camada basal que contêm microlesöes, onde o vírus penetra e perde o capsídeo. Os tipos benignos de HPV ficam associados ao genoma celular na forma epissomal. Nas lesöes malignas, os vírus ficam integrados ao DNA celular. O HPV é um vírus transmitido sexualmente e responsável pela transformaçäo maligna celular e, portanto, de extrema importância epidemiológica. Este trabalho é um estudo de revisäo sobre epidemiologia, métodos diagnósticos e tratamento das infecçöes causadas pelo papilomavírus humano.

Microbiota vaginal durante o ciclo menstrual / Vaginal microbiota during the menstrual cycle

Com o objetivo de detectar variaçöes da microbiota vaginal, pH e número de leucócitos polimorfonucleares nas diferentes fases do ciclo menstrual, dez mulheres assintomáticas foram amostradas por três semanas consecutivas e avaliadas hormonalmente através de estendidos citológicos corados pelo método de Papanicolaou. Lactobacilos anaeróbios facultativos predominaram nas amostras colhidas das fases pós-menstrual, ovulatória e pré-menstrual em 90 por cento das mulheres amostradas. Näo houve alteraçöes significativas da microbiota e pH vaginal. O número médio de leucócitos foi maior nos espécimes colhidos na fase pré-menstrual. Flutuaçöes hormonais, durante o ciclo menstrual, näo alteram significativamente a microbiota vaginal; entretanto, a presença de um número apreciável de leucócitos näo deve ser utilizada como critério para a triagem de pacientes portadoras de vaginite em espécimens colhidos na fase pós-menstrual.

Comparaçäo do Papanicolau e cultura em células para diagnóstico de infecçöes cervicais causadas por Chlamydia trachomatis / Comparison of Papanicolaou smear and cell culture in the diagnosis of Chlamydia trachomatis cervical infections

Neste estudo, comparamos a técnica do Papanicolaou e cultura em células para a detecçäo de infecçöes cervicais causadas por Chlamydia trachomatis. A taxa de isolamento foi de 15,7 porcento. Utilizando como critério a presença de células metaplásicas contendo corpúsculos de inclusäo intracitoplasmáticos, 3 das 11 pacientes (27,3 porcento) com cultura positiva tiveram os esfregaços corados pelo Papanicolaou interpretados como sugestivos de infecçäo clamidiana e 10 das 59 mulheres (16,9 porcento) com cultura negativa apresentaram no Papanicolaou critérios morfológicos satisfatórios para o diagnóstico da infecçäo (sensibilidade de 27,3 porcento e especificidade de 83,1 porcento). Esses dados confirmam os obtidos por outros autores que a técnica de Papanicolaou em esfregaços cervicais é de baixa sensibilidade para o diagnóstico ou triagem de infecçöes clamidianas e näo deve ser utilizada com essa finalidade